Přípravné kroky pro imunomagnetickou separaci cirkulujících nádorových buněk

Novotná, Eva

dc.contributor.advisor	Bílková, Zuzana	cze
dc.contributor.author	Novotná, Eva
dc.date.accessioned	2010-07-03T14:37:04Z
dc.date.available	2010-07-03T14:37:04Z
dc.date.issued	2010
dc.identifier	Univerzitní knihovna (sklad)	cze
dc.identifier.uri	http://hdl.handle.net/10195/36687
dc.description.abstract	Detekce cirkulujících nádorových buněk v krvi pacientů je důležitá nejen pro včasné odhalení nádorového bujení, ale hlavně pro sledování průběhu a úspěšnosti protinádorové terapie. Tato diplomová práce vznikla jako součást projektu zabývajícího se vývojem nového mikroprůtokového zařízení pro izolaci těchto buněk. Izolace cílových buněk je zprostředkována magnetickými částicemi s navázanými specifickými protilátkami proti povrchovým strukturám specifickým pro cirkulující nádorové buňky. Cílem naší práce byl výběr vhodných magnetických částic pro imobilizaci protilátek, optimalizace jejich vazby a provedení přípravných kroků pro separaci buněk. Jako modelové protilátky byly používány lidské IgG, které jsme nejprve imobilizovali na magnetické částice s různými funkčními skupinami. Vazba IgG na tyto částice byla jak orientovaná, tak neorientovaná. Účinnost vazby IgG jsme kvantifikovali pomocí několika analytických a imunoanalytických metod. Poté jsme se zaměřili na orientovanou vazbu protilátek na komerční a nově syntetizované magnetické částice, porovnávali účinnost vazby u obou typů částic a optimalizovali podmínky této vazby. Výsledky optimalizací budou dále využity u nově syntetizovaných částic s hydrazidovou funkční skupinou (-CO-NH-NH2), které budou svými parametry vyhovovat pro mikroprůtokové systémy. Posledním úkolem naší práce bylo vyzkoušet imunomagnetickou separaci buněk pomocí komerčních částic s imobilizovanými specifickými protilátkami. Jako modelový systém pro separaci eukaryontních krevních buněk jsme nejprve zvolili bakteriální buňky, separovali je podle doporučeného postupu a poté některé kroky optimalizovali pro naše podmínky a vyhodnotili procentuální účinnost optimalizovaných separací. Nakonec jsme provedli separaci lidských buněk z plné krve.	cze
dc.format	128 s.	cze
dc.format.extent	2745823 bytes	cze
dc.format.mimetype	application/pdf	cze
dc.language.iso	cze
dc.publisher	Univerzita Pardubice	cze
dc.rights	Práce není přístupná	cze
dc.subject	cirkulující nádorové buňky	cze
dc.subject	magnetické částice	cze
dc.subject	protilátky	cze
dc.subject	imunomagnetická separace buněk	cze
dc.subject	circulatin tumour cells	eng
dc.subject	Magnetic particles	eng
dc.subject	IgG antibodies	eng
dc.subject	immunomagnetic cell separation	eng
dc.title	Přípravné kroky pro imunomagnetickou separaci cirkulujících nádorových buněk	cze
dc.title.alternative	First steps in development of immunomagnetic carrier for efficient separation of circulating tumor cells	eng
dc.type	diplomová práce	cze
dc.date.accepted	2010	cze
dc.description.abstract-translated	Detection of circulating tumor cells (CTCs) in the blood of patients is important not only for the early detection of tumor growth but mainly for monitoring of the progress and success of anticancer therapy. This thesis was created as a part of project dealing with the development of a new microfluidic device for isolation of these cells. Isolation of target cells is mediated by magnetic particles with immobilized specific antibodies against surface structures specific for CTCs. The aim of our study was to select suitable magnetic particles for antibody immobilisation, optimisation of binding efficiency and select the carriers suitable for immunomagnetic separation. As a model antibody human IgG molecules were used. We immobilized them on the surface of magnetic particles with different functional groups, so the IgG molecules were either randomly without site-specific orientation or orientedly with steric accessible both binding sites. Binding efficiency of IgG was quantified by several analytical and immunoanalytical methods. Then we performed site-specific immobilization of IgG molecules to the commercial and newly synthesized magnetic particles, we optimized reaction conditions and compared the effectiveness of the binding. Results will be applied to preparation of CTC-specific immunosorbent based on newly-synthesized particles with hydrazide functional groups (-CO-NH-NH2), whose parametres are suitable for use in microfluidic device. The final task of our study was to test the immunomagnetic cell separation using commercial particles with specific antibodies immobilized on their surface. As a model system we initially chose the bacterial cells, separated them according to the recommended procedure and then we optimized some steps for our conditions and evaluated the percentage efficiency. Finally, we performed the separation of human cells from whole blood.	eng
dc.description.department	Katedra biologických a biochemických věd	cze
dc.thesis.degree-discipline	Analýza biologických materiálů	cze
dc.thesis.degree-name	Mgr.	cze
dc.thesis.degree-grantor	Univerzita Pardubice. Fakulta chemicko-technologická	cze
dc.identifier.signature	D21804	cze
dc.identifier.signature	D21804
dc.thesis.degree-program	Speciální chemicko-biologické obory	cze
dc.description.defence	1. Prezentace výsledků diplomové práce 2. Diskuze k posudkům vedoucího a oponenta diplomové práce 3. Diplomantka zodpověděla všechny dotazy a připomínky k DP	cze
dc.description.grade	Dokončená práce s úspěšnou obhajobou	cze