Studijní obor:Bioanalytická laboratorní diagnostika ve zdravotnictví
Abstrakt:
Diplomová práce se zabývá změnami energetického metabolismu buňky po působení modelových toxických látek. Teoretická část se věnuje popisu mitochondrií, podrobnému popisu dýchacího řetězce, zejména syntéze ATP, a metodám detekce koncentrace ATP. Dále je zde popsán možný vztah proteinů teplotního šoku (= HSP) a apoptózy. V závěru jsou uvedeny metody pro detekci HSP proteinů.
Experimentální část se věnuje optimalizaci přípravy buněčného materiálu a luminiscenční metody pro detekci intracelulární koncentrace ATP po působení modelových toxických sloučenin na buněčných liniích SH SY5Y a A549. Jako modelové jsme zvolili cisplatinu, CdCl2, acetaminofen a straurosporin. Pro popis změn energetického metabolismu u testovaných buněk jsme použili WST 1 test, fluorescenční sondu monochlorobiman, stanovení koncentrace ATP a metodu Simple Western. Morfologii buněk inkubovaných s toxickými látkami jsme pozorovali pod mikroskopem ve fázovém kontrastu, pro vizualizaci cytoskeletu jsme zvolili fluorescenčně značený faloidin a pro pozorování jader sondu Hoechst 33258. V závěru práce jsou výsledky diskutovány.