Elektrochemická Detekce Enzymové Aktivity Kináz Imobilizovaných na Magnetické Částice

Abstract

Proteinkinázy jsou enzymy zajišťující jednu z nejdůležitějších posttranslačních modifikací proteinů, fosforylaci. Fosforylace reguluje nejen fyziologické buněčné procesy, ale je také zapojena do takových patologických reakcí spojených s mnoha nemocemi. Proto je důležité sledovat aktivitu kinázy a inhibitorů, na což je kladen důraz při vývoji terapeutických cílů. Proteinkináza A byla imobilizována kovalentně na magnetických částicích. Pro stanovení enzymové aktivity byl nízkomolekulární substrát Kemtide fosforylován v přítomnosti adenosin-thiotrifosfátu (ATP-S). Thiofosforylovaný peptid následně spontánně reagoval s nanočásticemi koloidního zlata (AuNP) a následovala čtvercová katodická stripovací voltametrická analýza na sítotiskových uhlíkových elektrodách. Generovaný signál [AuCl4]- odpovídá úrovni fosforylace a tím i aktivitě enzymu.