Zobrazit minimální záznam
dc.contributor.advisor |
Roušar, Tomáš |
|
dc.contributor.author |
Nýdlová, Erika
|
|
dc.date.accessioned |
2011-06-01T13:15:53Z |
|
dc.date.available |
2011-06-01T13:15:53Z |
|
dc.date.issued |
2011 |
|
dc.identifier |
Univerzitní knihovna (sklad) |
cze |
dc.identifier.uri |
http://hdl.handle.net/10195/38714 |
|
dc.description.abstract |
Glutathionreduktasa (GR) je řazena do skupiny dimerických flavoenzymů, které katalyzují přenos elektronů díky přítomnosti flavinadenindinukleotidu ve své struktuře. Skládá se ze dvou identických podjednotek, na kterých jsou umístěna vazebná místa pro NADPH a také pro GSSG. Hlavní funkcí tohoto enzymu je NADPH-dependentní redukce oxidované formy glutathionu (GSSG) na formu redukovanou (GSH). Aktivita glutathionreduktasy je nejčastěji stanovována spektrofotometrickou metodou, která je založena na měření poklesu absorbance způsobené oxidací NADPH při 340 nm. Rychlost poklesu absorbance je přímo úměrná aktivitě GR. Při tomto stanovení se využívají dva substráty - GSSG a NADPH. Cílem naší práce bylo otestovat vliv různých parametrů metodiky (teplota, pH, stabilita) na stanovení aktivity glutathionreduktasy u purifikované kvasinkové GR a zjistit optimální podmínky stanovení. Pro stanovení aktivity glutathionreduktasy jsme jako optimální pufr určili draselný fosfátový pufr (pH 7,4). Testovali jsme také závislost koncentrace GSSG a NADPH na aktivitě GR, kdy jako optimální koncentrace byly zvoleny 10 mM GSSG a 1,6 mM NADPH. Zjistili jsme, že GR je stabilní po dobu nejméně dvou hodin při laboratorní teplotě (21 °C). P ři dlouhodobém zamražení (-20 °C) a zárove ň opakovaným zamražením/rozmražením došlo k poklesu aktivity. Dále jsme sledovali možný inhibiční vliv některých komerčně dostupných látek (ethakrynová kyselina, N-ethylmaleimid, diethylmaleát, glutathion) na aktivitu GR. V přítomnosti N-ethylmaleimidu překvapivě nedošlo k poklesu aktivity GR. Pouze u ethakrynové kyseliny a glutathionu byla inhibice prokázána. Při použití 500 mM koncentrace ethakrynové kyseliny byla zjištěna téměř 20% inhibice aktivity. Zjistili jsme také, že v přítomnosti 10 mM GSH, což je koncentrace vyskytující se běžně v buňce, došlo k poklesu glutathionreduktasové aktivity o 60 %. |
cze |
dc.format |
82 s. |
cze |
dc.format.extent |
2897077 bytes |
|
dc.format.mimetype |
application/pdf |
|
dc.language.iso |
cze |
|
dc.publisher |
Univerzita Pardubice |
cze |
dc.rights |
Práce není přístupná |
cze |
dc.subject |
glutathion |
cze |
dc.subject |
glutathionreduktasa |
cze |
dc.subject |
ethakrynová kyselina |
cze |
dc.subject |
diethylmaleát |
cze |
dc.subject |
spektrofotometrie |
cze |
dc.subject |
glutathione |
eng |
dc.subject |
glutathione reductase |
eng |
dc.subject |
ethacrynic acid |
eng |
dc.subject |
diethyl maleate |
eng |
dc.subject |
spectrophotometry |
eng |
dc.title |
Glutathionreduktasa - stanovení aktivity a možnosti její modulace |
cze |
dc.title.alternative |
Glutathione reductase - assessment and modulaton of the enzyme activity |
eng |
dc.type |
diplomová práce |
cze |
dc.contributor.referee |
Červinková, Zuzana |
|
dc.date.accepted |
2011 |
|
dc.description.abstract-translated |
Glutathione reductase (GR) belongs to a group of dimeric flavoenzymes, which catalyze the transfer of electrons due to the presence of flavin adenin dinucleotide in their structure. GR consists of two identical subunits on which binding sites for NADPH and GSSG are located. The main function of this enzyme is NADPH-dependent reduction of oxidized glutathione form (GSSG) to reduced form (GSH). Activity of glutathione reductase is mostly determined by a spectrophotometric method, which is based on measurement of the absorbance decrease at 340 nm caused by oxidation of NADPH. The rate of absorbance decrease is directly proportional to activity of glutathione reductase. There are two substrates used - GSSG and NADPH. The aim of our study was to estimate the influence of various parameters of the method (temperature, pH, stability), to determine the activity of purified yeast glutathione reductase and establish the optimal conditions for determination. To determine the GR activity, we evaluated potassium phosphate buffer (pH 7.4) as the optimal buffer. We estimated the concentration dependence of GSSG and NADPH on the activity of glutathione reductase. The concentrations of 10 mM GSSG and 1.6 mM NADPH were chosen as optimal. We found that glutathione reductase is stable for at least two hours at laboratory temperature (21 °C). During prolonged freezing at -20 °C and also repeated freeze/thaw cycles the activity decreased significantly. Furthermore, we investigated the possible inhibitory effect of several commercially available substances (ethacrynic acid, N-ethylmaleimide, diethyl maleate, glutathione) on GR activity. Surprisingly, the decrease of GR activity did not occure in presence of N-ethylmaleimide. The enzyme activity was decreased only in presence of ethacrynic acid and glutathione. In 500 mM ethacrynic acid, we found almost 20% inhibition of the activity. We also found out that in the presence of 10 mM GSH, i. e. the concentration occuring in the cell, the GR activity was decreased by 60 %. |
eng |
dc.description.department |
Katedra biologických a biochemických věd |
cze |
dc.thesis.degree-discipline |
Analýza biologických materiálů |
cze |
dc.thesis.degree-name |
Mgr. |
|
dc.thesis.degree-grantor |
Univerzita Pardubice. Fakulta chemicko-technologická |
cze |
dc.identifier.signature |
D23683 |
|
dc.thesis.degree-program |
Speciální chemicko-biologické obory |
cze |
dc.description.defence |
1. Prezentace výsledků diplomové práce 2. Diskuze k posudkům vedoucího a oponenta diplomové práce 3. Diplomantka zodpověděla všechny dotazy a připomínky k diplomové práci |
cze |
dc.description.grade |
Dokončená práce s úspěšnou obhajobou |
cze |
Tento záznam se objevuje v následujících kolekcích
Zobrazit minimální záznam
|
Vyhledávání
Procházet
-
Vše v Digitální knihovně
-
Tato kolekce
Můj účet
|